硝酸甘油具有緩解心絞痛、改善心肌供血的作用。硝酸甘油是一種直接擴張血管的藥物，它能擴張冠狀動脈和周圍動靜脈血管，所以當出現心肌缺血時，可以通過口含硝酸甘油來緩解心絞痛。
因此，冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者，可以隨身攜帶硝酸甘油，一旦出現心絞痛，可暫時緩解心肌供血，作為臨時急救的手段但作用時間很短，只能維持幾分鐘，因此需要及時進行后續治療。

一般情況下，硝酸甘油對心肌梗死的作用是擴張血管，具體內容如下：
現有的研究表明，硝酸甘油對心肌梗塞病人具有以下功效：1、降低心肌耗氧量。硝酸甘油能使血管容積膨脹，減少心肌的負荷，即心肌的負荷。減少心臟的負擔，可以減少心肌的氧氣消耗。2.增強心肌灌注。動物及臨床試驗結果表明，經舌下或靜脈注射硝酸甘油，能擴大冠狀動脈的管徑，并能提高血液流速。從而提高了心臟的血流，改善了缺血。

硝酸甘油適用于治療或預防心絞痛。可直接松弛血管平滑肌特別是小血管平滑肌，使周圍血管舒張，外周阻力減小，回心血量減少，心排出量降低，心臟負荷減輕，心肌氧耗量減少，因而心絞痛得到緩解。

硝酸甘油可以直接血管擴張的藥物，可以擴張冠狀動脈，還可以擴張周圍動靜脈的血管，所以冠心病的病人發生心肌缺血的時候，口含硝酸甘油可以起到緩解心絞痛的作用。但是它的作用時間很短，只有幾分鐘，所以需要后續的處理，病人要立刻休息，不要再運動。

硝酸甘油軟膏是治療肛裂的常用藥物之一，是肛裂初期治療的藥物。其主要作用是降低肛門靜息壓，舒張血管，改善肛管血供，促進肛裂愈合。大多數病人免于手術。其主要缺點是不良反應，如頭痛、直立性高血壓、不能控制肛門排氣以及灼熱感等。

本藥不可吞服，青光眼患者忌用，長期連續服用可產生耐受性，本品與普萘洛爾聯合應用，可有協同作用，并互相抵消各自缺點。但后者可引起血壓下降，從而導致冠脈流量減少，有一定危險，需加注意，急性循環衰竭、嚴重低血壓禁用，本品忌與含乙醇的藥酒或酊劑一起服用。